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CCK-8,細(xì)胞增殖檢測較為合適的選擇
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-08 點(diǎn)擊次數(shù): 2813次什么是細(xì)胞增殖檢測?
細(xì)胞增殖是細(xì)胞在周期調(diào)控的因子下,通過DNA復(fù)制等反應(yīng),完成細(xì)胞分裂的過程。在細(xì)胞增殖中,新細(xì)胞的產(chǎn)生過程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長和維持,同時(shí),它也被嚴(yán)格調(diào)控著,以防失控的細(xì)胞分裂(可出現(xiàn)在各種癌癥)導(dǎo)致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因?yàn)榧?xì)胞增殖對(duì)生物活動(dòng)的這種廣泛影響,其在各種環(huán)境中的準(zhǔn)確評(píng)估變得十分重要。
腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化過程
細(xì)胞增殖是通過細(xì)胞分裂引起的細(xì)胞數(shù)量增加,在整個(gè)生命周期中對(duì)正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細(xì)胞會(huì)處于持續(xù)增殖狀態(tài),如皮膚和骨髓細(xì)胞,但許多成人組織中的細(xì)胞會(huì)處于非增殖狀態(tài),只有在損傷或感染時(shí),才能被激活來補(bǔ)充細(xì)胞。與之相反,細(xì)胞周期關(guān)鍵基因突變引起的細(xì)胞增殖失調(diào)是各類癌癥的標(biāo)志,會(huì)造成腫瘤異常的不受控制的生長。
增殖檢測一般用于分析分裂中的細(xì)胞數(shù)量的變化,進(jìn)而反應(yīng)細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性,細(xì)胞增殖檢測是細(xì)胞分析和藥物研發(fā)中經(jīng)常會(huì)使用的手段。目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué),分子生物學(xué),藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。
細(xì)胞增殖檢測的方法
一類是直接法,這種方法就是直接測定進(jìn)行分裂的細(xì)胞數(shù)來評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力,另一類是間接的方法,我們通過檢測細(xì)胞的活力來評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。
常見的細(xì)胞增殖檢測方法包含:直接計(jì)數(shù)法;MTT檢測法;MTS檢測法;CCK-8檢測法;3H-TdR滲入法;Brdu/EdU檢測法;CFSE檢測法;刃天青還原法;活細(xì)胞蛋白酶底物法/ATP法等。
常見檢測方法對(duì)比
其中,MTT比色是一種目前被廣泛采用的檢測細(xì)胞生長和存活的方法。
CCK-8試劑盒全稱Cell Counting Kit-8,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
CCK-8檢測細(xì)胞活性原理圖
其工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK-8被經(jīng)常用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)等。
優(yōu)點(diǎn):
· 酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測不會(huì)造成干擾;
· 靈敏度高,可以測定較低細(xì)胞密度;
· 細(xì)胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到最佳測定時(shí)間;
· 檢測時(shí)間短;
· 重復(fù)性優(yōu)于MTT法;
· 操作簡單,省時(shí)省力,省去了洗滌細(xì)胞,適合批量樣品檢測;
· 檢測試劑很穩(wěn)定。
細(xì)胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒系列貨號(hào)規(guī)格:
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品規(guī)格 K009-100 CCK 100tests K009-500 CCK 500tests K009-1000 CCK 1000tests K009-3000 CCK 3000tests K010-100 Cell Counting Sensitive Kit 100tests K010-500 Cell Counting Sensitive Kit 500tests K010-1000 Cell Counting Sensitive Kit 1000tests K010-3000 Cell Counting Sensitive Kit 3000tests
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